HIV是愛滋病的英文縮寫.英文名稱：human immunodeficiency virus, HIV(以下是網(wǎng)上找的資料)HIV概述從1981年開始，美國疾病控制中心（CDC）不斷收到有關(guān)卡波濟肉瘤（kaposi’ sarcoma）的病例報告，由于新發(fā)現(xiàn)的病例與以往的有所不同，死亡率高，而且發(fā)病率呈快速上升趨勢，引起了CDC的高度重視，1982年9月，CDC正式提出了獲得性免疫缺陷綜合癥(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS或艾滋病)的概念，隨后的調(diào)查研究證明這是一種新的傳染病。1983年，法國巴斯德研究所的Montagnier等首先從一例淋巴瘤患者的淋巴結(jié)中分離出一種病毒，被稱為淋巴結(jié)病相關(guān)病毒（lymphadenopathy associated virus, LAV）,1984年初，美國國立衛(wèi)生研究院國立癌癥研究所的Gallo 等從艾滋病患者的外周血單核細胞（PBMC）中分離到稱為人嗜T淋巴細胞病毒Ⅲ型（human T-cell lymphotropic virus type Ⅲ, HTLV-Ⅲ）的病毒。同年，美國加州大學的Levy等也從艾滋病患者的外周血淋巴細胞中分離出一種病毒，稱艾滋病相關(guān)病毒（AIDS related virus, ARV）。1986年，國際病毒分類委員會（International Committee on Taxonomy of Viruses, ICTV）將LAV/HTLV-Ⅲ/ARV統(tǒng)一命名為人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV），又稱艾滋病毒。由HIV感染而引起的疾病稱為艾滋病，全稱為獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），該病患者的免疫功能部份或完全喪失，CD4+細胞數(shù)目減少，繼而發(fā)生機會性感染、腫瘤等，臨床表現(xiàn)多種多樣。該病傳播速度快、病死率高，且目前無法治愈，引起了各國政府和社會的關(guān)注。HIV在病毒分類學上屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae）慢病毒屬（lentivirus），目前已發(fā)現(xiàn)兩種HIV，分別為HIV-1和HIV-2。兩者具有相似的病毒結(jié)構(gòu)和傳播途徑。HIV-2主要分布于非洲西部，在歐洲和美洲的一些感染者中也被檢測到。其毒力和傳播力都低于HIV-1，引起的艾滋病病程較慢且較緩和。HIV-1廣泛分布于世界各地，是引起全世界AIDS流行的病原，目前HIV的研究也是以HIV-1為主進行的。HIV的流行呈世界性分布，非洲為HIV的發(fā)源地和重災區(qū)，歐洲和美洲也為主要流行區(qū)，近年HIV在亞洲的流行呈高速增長的趨勢。我國自1985年首次發(fā)現(xiàn)HIV感染者，至今已有60～80萬人發(fā)生了感染，專家估計，如果不迅速采取有效的預防措施，按目前的年平均30%的增長速度，到2010年，我國的HIV感染者將超過1000萬。在非洲的有些國家，HIV的感染率達總?cè)丝?0%以上。因此，預防和治療艾滋病，已不僅僅是挽救個人生命的問題，而是關(guān)系到民族存亡的大事。HIV的一般概念艾滋病病毒（HIV）顆粒呈球形，直徑90 nm～130nm。病毒的核心呈中空錐形，由兩條相同的單鏈RNA鏈、逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白質(zhì)組成。核心之外為病毒衣殼，呈20面體立體對稱，含有核衣殼蛋白質(zhì)。最外層為包膜，包膜上的糖蛋白有刺突狀結(jié)構(gòu)，是HIV與宿主細胞受體結(jié)合位點和主要的中和位點（圖）。HIV屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，其RNA中含有g(shù)ag、env 和pol基因以及6種調(diào)控基因 〔tat, vif, vpr, vpx (vpu), nef, rev〕。gag基因編碼病毒的核心蛋白；pol基因編碼病毒復制所需要的酶類（逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶）；env基因所編碼病毒包膜蛋白，是HIV免疫學診斷的主要檢測抗原。調(diào)控基因編碼輔助蛋白，調(diào)節(jié)病毒蛋白合成和復制。現(xiàn)有兩型HIV：HIV-1和HIV-2，它們主要區(qū)別在于包膜糖蛋白上。HIV是一種變異性很強的病毒，不同的病毒株之間差異很大，甚至同一毒株在同一感染者體內(nèi)僅數(shù)月就可以改變，使原中和抗體失去中和效能，這給HIV疫苗的研制造成很大困難。目前在全球流行的HIV-1毒株已出現(xiàn)三個組，即M、O和N 組，其中M組又可分為A到J共10個亞型，而且亞型間的重組體已有發(fā)現(xiàn)。HIV-2現(xiàn)有A～F共6個亞型。目前也有學者根據(jù)病毒的生物學特性對HIV-1進行分群，如根據(jù)病毒與宿主細胞結(jié)合所利用的輔助受體的不同（CCR5、CXCR4），分為R5和X4毒株；或根據(jù)宿主范圍及復制特性不同，分為非合胞體誘導株（NSI）和合胞體誘導株（SI）；有毒力株和無毒力株；快/高型和低/慢型等。HIV對外界抵抗力較弱，遠較乙型肝炎病毒（HBV）對外界的抵抗力低得多。對熱、乾燥敏感，不耐酸。60 ℃以上就可被滅活。因此，注射器具、醫(yī)療用具通過高 溫消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以達到消毒目的。HIV對化學品也十分敏感，常用的消毒劑如70%酒精、10%漂白粉、2%戊二醛、4%福爾馬林等均能滅活病毒。HIV的傳染源艾滋病病人和無癥狀HIV攜帶者為主要傳染源。HIV的傳播途徑① 性接觸傳播。主要為男性同性戀及男女之間的異性性接觸，女性同性戀少見。目前男女之間異性傳播已成為HIV傳播的主要方式，而女性對HIV的易感性比男性高4倍。② 通過輸血或血制品傳播。主要為被HIV污染的注射用具、血液及血液制品。③ 母嬰傳播。包括宮內(nèi)、分娩過程及產(chǎn)后等。據(jù)美國CDC的調(diào)查結(jié)果，在≤13歲的小兒HIV/AIDS中，70%以上都是在圍生期由母親傳播給嬰兒的。④ 亞型及其分布。HIV為逆轉(zhuǎn)錄病毒，而逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校正修復功能，因而HIV的變異頻率非常高，每一輪復制都會引入約10個堿基的錯誤。高的變異頻率使世界不同地區(qū)甚至同一感染個體不同時期HIV的基因組都有較大差異。根據(jù)HIV gag和env區(qū)的基因序列，目前HIV-1可分為M、N和O三個進化組，兩個進化組之間序列的異質(zhì)性超過45%。依據(jù)env區(qū)序列，M組又可分為A-J 10個亞型，亞型之間序列的異質(zhì)性為30%。A和D亞型主要見于中非；B亞型見于北美、歐洲、澳大利亞等；C亞型在南非、印度及中國；E亞型在中非、泰國及中國；F亞型在巴西和扎伊爾；G亞型在俄羅斯、臺灣及加蓬；H亞型見于非洲；I亞型在塞浦路斯；J亞型在非洲。O組最初從喀麥隆分離而來，主要分布于喀麥隆、加蓬等國。N組為新近分離的一個組，其具體分布有待進一步調(diào)查。HIV的基因組結(jié)構(gòu)及功能HIV基因組為單股正鏈RNA二倍體，每條RNA鏈長約9.8kb，兩條鏈的5’端借氫鍵形成二聚體。與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒相同，HIV的基因結(jié)構(gòu)從5’端到3’端依次為5’LTR-gag-pol-env-3’LTR。5’端有帽狀結(jié)構(gòu)m7G5ppp5GmpNp，3’端有polyA序列。除三個編碼結(jié)構(gòu)蛋白的基因gag、pol、env外，HIV還有較其他逆轉(zhuǎn)錄病毒更多的調(diào)節(jié)基因（regulatory gene）和附加基因(accessory gene)，其編碼的的調(diào)節(jié)蛋白在病毒的整個感染及復制過程中具有非常重要的作用，目前已發(fā)現(xiàn)至少有7種：tat、rev、nef、vpr、vpu、vpx和vif。1．長未端重復序列：HIV基因組兩端的長未端重復序列（long terminal repeat, LTR）不編碼病毒產(chǎn)物，對于病毒基因表達的起始和調(diào)節(jié)至關(guān)重要，其上有許多細胞轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點，可分為調(diào)節(jié)單位、核心轉(zhuǎn)錄單位和反式激活效應(yīng)元件單位（TAR）三個不同的調(diào)控功能區(qū)。2． Gag基因：即組特異性抗原基因，編碼分子量為55KD的前體蛋白（P55），由未拼接的病毒mRNA表達。P55經(jīng)病毒蛋白酶切割，由N端至C端形成P17、P24、P15三種蛋白。P17稱為基質(zhì)蛋白（MA），附著于病毒脂質(zhì)又層膜的內(nèi)側(cè)，形成毒粒的內(nèi)膜，起穩(wěn)定毒粒的作用。P24稱及殼蛋白，形成病毒的錐形核。P15進一步被裂解為P9和P7兩種核殼蛋白，與病毒的RNA結(jié)合。3． Pol基因：Pol基因編碼病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）P66和整合酶（IN）P32，由未拼接的病毒mRNA表達。RT由兩個亞單位P66和P51構(gòu)成，其N 端完全一致，具DNA聚合酶活性，而C端由于病毒蛋白酶的不對稱切割，使一個亞單位C端的部分氨基酸被切除而失去RNA酶H的功能，另一亞單位C端的RNA酶H功能域則未被切除。HIV進行復制時，首先在RT的N端的DNA聚合酶功能區(qū)的作用下，以RNA為模板合成互補的DNA，表現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)錄酶活性，然后在P51的協(xié)助下，P66 C端的RNA酶H功能區(qū)降解RNA/DNA 雙鏈中的RNA鏈，表現(xiàn)為RNA酶H活性，最后以此單鏈DNA為模板，由P66亞單位合成互補DNA而成雙鏈DNA，表現(xiàn)出DNA聚合酶功能。整合酶能夠?qū)⒛孓D(zhuǎn)錄成的雙鏈DNA整合入宿主染色體DNA，整合過程可分三步：首先由IN在病毒線狀平端DNA的3’端由3’→5’方向切下2個核苷酸，形成CA-OH-3’，同時在宿主DNA雙鏈整合部位上各切開一5bp的切口，然后在IN的作用下，CA-OH-3’與宿主DNA切開部位的5’-P形成磷酸二酯鍵，最后整合部位被修補完整。4． Env基因：Env基因編碼病毒的膜蛋白，由單一拼接的mRNA進行表達，首先在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)合成分子量為88KD的蛋白質(zhì)，在向高爾基體的轉(zhuǎn)運過程中被糖基化而成為分子量160KD（gp160）的包膜糖蛋白前體，糖基化為病毒的傳染性所必須。gp160被蛋白酶切割為gp120和gp41兩部分，gp120位于感染細胞和毒粒的表面，稱外膜蛋白，其上有5個高變區(qū)（V1~V5）和6個保守區(qū)（C1~C6）。高變區(qū)中的V3環(huán)區(qū)是阻斷HIV傳播的中和抗體結(jié)合的主要靶位，gp41鑲嵌于病毒的脂質(zhì)雙層中，稱跨膜蛋白，在病毒感染過程中能夠介導病毒脂膜與細胞膜的融合。gp120與 gp41的N端以非共價鍵結(jié)合，當HIV感染T淋巴細胞或巨噬細胞時，gp120首先與細胞表面的CD4分子結(jié)合，導致空間構(gòu)象發(fā)生改變，使gp41與細胞膜充分接觸而發(fā)生病毒與細胞膜的融合，病毒核心進行細胞。5．Tat基因：Tat基因由兩個外顯子構(gòu)成，編碼HIV復制和基因表達所必須的反式激活蛋白(transactivator, Tat)，又稱反式激活因子（trans-activating factor），能夠增強病毒復制的起始，促進mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯。Tat與HIV RNA 5’端LTR結(jié)合后能夠極大地提高HIV基因的轉(zhuǎn)錄水平。另外，tat可能還具有轉(zhuǎn)錄延伸因子的作用，延長mRNA的轉(zhuǎn)錄。6．Rev基因：Rev基因由兩個外顯子組成，分別編碼25個氨基酸和91個氨基酸的肽段，由完全拼接的mRNA進行表達，兩個肽段結(jié)合形成19KD（P19）的病毒顆粒蛋白表達調(diào)節(jié)因子（regulator of expression of virion protein, Rev）在胞質(zhì)內(nèi)合成后由其上的核定位信號（nuclear localization signal, NLS）介導進入核內(nèi)聚集于核仁。Rev蛋白是HIV復制非常重要的一個反式激活因子，能夠促進HIV的基因轉(zhuǎn)錄由早期向晚期轉(zhuǎn)變，即由調(diào)節(jié)蛋白基因的轉(zhuǎn)錄向結(jié)構(gòu)蛋白基因的轉(zhuǎn)錄進行轉(zhuǎn)變。因此，Rev蛋白對HIV的調(diào)節(jié)基因具有負調(diào)控作用，而對病毒結(jié)構(gòu)基因和附加基因具正調(diào)控作用。另外，Rev與其應(yīng)答元件（Rev responsive element, RRE）的結(jié)合還可促進未拼接或未完全拼接的病毒mRNA由胞核向胞漿運輸。7．Nef 基因：Nef 基因由單一外顯子構(gòu)成，編碼27KD的甲基化蛋白。Nef 蛋白是HIV復制過程中的負調(diào)節(jié)因子（negative regulation factor），具多種功能，既可進行正調(diào)節(jié)，也可進行負調(diào)節(jié)。能夠增強或減弱病毒的復制，既能激活T細胞，增加病毒感染，又能抑制病毒的超感染。8．其他調(diào)節(jié)蛋白基因：Vpr基因編碼病毒蛋白r，高度保守。Vpr蛋白非HIV復制所必須，能反式激活病毒基因的表達，在HIV感染未分裂的細胞時使細胞停留在細胞周期的G2期。另外，Vpr基因的存在還可使HIV感染細胞時致細胞病變效應(yīng)增加。Vpu基因編碼病毒蛋白u，為HIV-1所特有，Vpu蛋白為非HIV復制所必須的雙親性膜整合蛋白，能夠增強病毒顆粒的組裝和釋放，介導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中CD4分子的快速降解。Vif基因編碼病毒顆粒感染性因子（virion infectivity factor, Vif）。Vif蛋白亦非HIV復制所必須，能夠增加病毒顆粒的感染性。HIV病毒感染和復制HIV主要侵犯人體的CD4+ T淋巴細胞和巨噬細胞，其感染過程包括病毒的吸附、侵入、逆轉(zhuǎn)錄、基因組的整合、表達及釋放等過程。當感染發(fā)生時，病毒的外膜糖蛋白gp120首先與細胞表面的CD4分子結(jié)合并與輔助受體CCR5或CXCR4等結(jié)合，gp120空間構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出跨膜蛋白gp41與細胞膜作用，導致病毒包膜與細胞膜融合，病毒核心進入細胞內(nèi)，脫殼后病毒基因組在RT作用下以病毒RNA為模板合成cDNA，再以此cDNA為模板合成雙鏈DNA，經(jīng)環(huán)化后在病毒IN的作用下隨機整合到細胞染色體上成為前病毒而長期存在并隨細胞的分裂而傳至子代細胞。此前病毒即為病毒復制時的轉(zhuǎn)錄模板，病毒進行復制時，早期轉(zhuǎn)錄的長鏈mRNA經(jīng)拼接后表達病毒的調(diào)節(jié)蛋白，待調(diào)節(jié)蛋白的量到達一定閾值后，病毒進入晚期轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生的未拼接的mRNA部分用來指導合成病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，部分作為病毒的基因組，與結(jié)構(gòu)蛋白進行裝配成為病毒核心顆粒，由胞膜出芽時獲得包膜及膜蛋白。HIV的致病機理在HIV感染人體的初期會有病毒血癥的出現(xiàn)，并有輕度的發(fā)熱及淋巴結(jié)腫大等癥狀，隨后病毒血癥大幅降低至難以檢測的水平，抗核心蛋白及包膜蛋白的抗體陸續(xù)出現(xiàn)，病程進入無癥狀帶毒期，即潛伏感染期（latent infection），病毒可潛伏存在長達數(shù)年甚至十多年，其潛伏機制目前尚不清楚。在某些因素的作用下，病毒大量復制，機體再次出現(xiàn)病毒血癥并出現(xiàn)艾滋病癥狀，體內(nèi)大量的輔助性T細胞被病毒破壞，造成機體細胞及體液免疫功能降低，無法抵御外界病原微生物的侵襲而發(fā)生免疫缺陷綜合癥。有關(guān)HIV的致病機理，目前還不十分清楚，一般認為，HIV感染CD4+ T 細胞后，病毒通過基因組整合，以前病毒形式存在于CD4+ 細胞，在感染的早期，通過Th1細胞分必細胞因子IL-2等，在IL-2刺激下CD8+ T淋巴細胞對CD4+細胞產(chǎn)生強大的免疫抑制作用，從而使病毒處于被抑制的潛伏狀態(tài)。在感染的晚期，Th2細胞的分泌占優(yōu)勢，通過分泌IL-10等細胞因子，使CD8+ T細胞失去對CD4+ 細胞的抑制，病毒增殖并釋放出新的病毒顆粒去感染更多CD4+細胞，從而造成CD4+ 細胞的大量死亡最后耗竭而失去其免疫功能。HIV檢測一、 HIV 檢測的特殊性HIV 檢測不同于其他病原微生物檢測，要求十分嚴格，任何錯誤的診斷，包括假陽性或假陰性，都會對被檢者產(chǎn)生十分重要的影響。因此， HIV 檢測必須嚴格按照國家制定的《艾滋病檢測工作管理辦法》和《艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（以下簡稱《規(guī)范》）進行，檢測的實驗室須經(jīng)當?shù)匦l(wèi)生行政部門審批合格，從事艾滋病檢測工作的技術(shù)人員須接受專門的技術(shù)培訓，并獲合格證書，診斷試劑應(yīng)選擇高敏感和高特異的，篩查呈陽性反應(yīng)的需用特異性更強的方法（如：免疫印跡試驗）進行確認，整個實驗過程應(yīng)有嚴格的質(zhì)量保證體系。二、 HIV抗體檢測目前國外用于 HIV 抗體篩查的方法很多，根據(jù)檢測原理不同分為酶聯(lián)免疫吸附法、凝集法和層析法，可對血液、唾液和尿液標本進行常規(guī)或快速檢測。在實際工作中常用的有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA ）、明膠凝集試驗和各種快速診斷試劑。自 1985 年第一代 ELISA 試劑問世以來，隨著醫(yī)學技術(shù)的飛速發(fā)展，包被抗原已從一代的全病毒裂解物發(fā)展為目前以基因重組和多肽抗原包被和標記、有著良好敏感性和特異性的三代雙抗原夾心試劑，檢測亞型包括 HIV-1 、 HIV-2 和 HIV-1 型的 O 亞型，窗口期由 10 周縮短至 3-4 周。為避免窗口期傳染，荷蘭、法國等國已研制出第四代以重組的多肽抗原和抗 P24 抗體包被的雙抗原夾心法試劑盒，可同時檢測抗原抗體，使窗口期縮短了 2-3 周，但其臨床價值有待評估。按《規(guī)范》要求，我國采供血機構(gòu)進行血液篩查和各醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)常規(guī)篩查檢測宜采用 ELISA 法，自采自供血的單位必須進行 HIV 抗體檢測，在尚未建立艾滋病篩查實驗室的偏遠地區(qū)或大醫(yī)院急診手術(shù)前可由經(jīng)過培訓的技術(shù)人員在規(guī)定的場所用快速試劑進行血液篩選。對用 ELISA 試劑或快速診斷試劑進行的篩查實驗如呈陰性反應(yīng)，即報告 HIV 抗體陰性；對呈陽性反應(yīng)的標本，篩查實驗室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進行重復檢測，如兩種試劑復測均呈陰性反應(yīng)，則報告 HIV 抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。篩查試劑必須是 HIV-1/2 混合型、經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局（ SDA ）注冊批準、批批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。HIV 抗體篩查呈陽性反應(yīng)的標本由于存在假陽性的可能，必須做確認試驗。國際上有 3 種確認試驗方法，包括免疫印跡試驗、條帶免疫試驗及免疫熒光試驗，目前以免疫印跡試驗最為常用。確認試劑必須經(jīng) SDA 注冊批準。免疫印跡試劑有 HIV-1/2 混合型和單一型，按《規(guī)范》要求，一般先用 HIV-1/2 混合型試劑進行檢測，根據(jù)《規(guī)范》中判定免疫印跡試驗結(jié)果的基本原則并參照所用試劑說明書綜合判定，無 HIV 抗體特異帶出現(xiàn)的報告 HIV 抗體陰性；出現(xiàn) HIV 抗體特異帶，符合 HIV-1 抗體陽性判定標準，則報告 HIV-1 抗體陽性。如出現(xiàn) HIV-2 型的特異性條帶，需用 HIV-2 型免疫印跡試劑再做單一的 HIV-2 型抗體確認試驗，呈陰性反應(yīng)，報告 HIV-2 抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報告 HIV-2 抗體血清學陽性，如需鑒別應(yīng)進行核酸序列分析。如果出現(xiàn) HIV 抗體特異帶，但帶型不足以判定為陽性，則判為 HIV 抗體不確定。對 HIV 抗體不確定者應(yīng)按《規(guī)范》要求進行隨訪，必要時可做 HIV-1 P24 抗原或核酸測定，但檢測結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認報告要依據(jù)血清學隨訪結(jié)果。由于目前唾液檢測試劑的敏感性和尿液檢測試劑的特異性明顯低于血液檢測試劑，故我國 SDA 已注冊批準的 HIV 抗體篩查和確認試劑只能用于血液標本檢測。三、 HIV 抗體檢測的質(zhì)量控制在所有實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)，每次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是由實驗室設(shè)置的弱陽性對照，一般以該試劑盒臨界值（ Cut off ）的 2-3 倍為宜。該血清可到專門單位購買，也可由實驗室自己制備。制備方法是：收集 HIV 抗體陽性和陰性血清， 56 ℃ 30min 滅活， 3000rpm 離心 15min ，弱陽性對照可以用 HIV 抗體陰性的健康人血清梯度稀釋 HIV 抗體強陽性血清、或用試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清混合并標定后得到，一般按一年使用量配制，用 0.2 μ m 濾膜過濾除菌，按一周實驗用量分裝、分類、標記并封口， -20 ℃ 凍存。該血清不可反復凍融，融化后應(yīng)存放 2 -8 ℃ ，一周內(nèi)使用。原則上每次實驗必須使用外部對照質(zhì)控 血清，以便監(jiān)控本次實驗的重復性和穩(wěn)定性，同時了解各批試劑盒的批間差異，繪制質(zhì)量控制圖。四、 HIV-1 P24 抗原檢測HIV 感染人體后有一段窗口期，在這段時期病毒抗體不能被檢出，但可以檢測到病毒相關(guān)抗原或分離病毒。故在窗口期檢測抗原是早期輔助診斷和縮短窗口期的一種方法，在感染早期和發(fā)病期抗原檢出率相對較高。 HIV-1 P24 抗原檢測還適用于： HIV-1 陽性母親所生嬰兒的早期輔助鑒別診斷；第四代 HIV-1 抗原 / 抗體 ELISA 試劑檢測呈陽性反應(yīng)、但 HIV-1 抗體確認陰性者的輔助診斷；監(jiān)測病程進展和抗病毒治療效果。P24 抗原檢測一般用 ELISA 雙抗體夾心法試劑，必須經(jīng)過 SDA 批準注冊。HIV-1 P24 抗原的陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗確認 , 該結(jié)果僅作為 HIV 感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診； HIV-1 P24 抗原檢測陰性只表示在本試驗中無反應(yīng)，不能排除 HIV 感染。五、HIV核酸檢測HIV 核酸檢測，通常是檢測 HIV RNA ，以前只能定性檢測血液中是否存在病毒核酸，而目前的技術(shù)可定量檢測血液中病毒復制水平。 HIV 核酸定性檢測可用于 HIV 感染的輔助診斷，如窗口期輔助診斷、病程監(jiān)控、指導治療方案及療效測定、預測疾病進程等。通常使用 PCR 或 RT-PCR 技術(shù)，使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑，引物可來自文獻或自行設(shè)計，應(yīng)盡量覆蓋所有或常見的毒株，也可使用復合引物。 HIV 核酸定量檢測多用于監(jiān)測 HIV 感染者的病程進展和抗病毒治療效果，目前常用的測定方法有逆轉(zhuǎn)錄 PCR 實驗（ RT-PCR ）、核酸序列擴增實驗（ NASBA ）、分支 DNA 雜交實驗（ bDNA ）等。在不同 HIV 定量檢測方法的選擇中，由于目前用于統(tǒng)一不同定量方法檢測值的標準品尚未問世，因此不同定量方法結(jié)果之間還無法直接進行比較，建議同一病人治療前后用同一方法進行 HIV 定量檢測。值得注意的是， HIV 核酸定性檢測陰性，只可報告本次實驗結(jié)果陰性，但不能排除 HIV 感染； HIV 核酸檢測陽性，可作為診斷 HIV 感染的輔助指標，不能單獨用于 HIV 感染的診斷，報告定性檢測結(jié)果時還應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。報告 HIV 核酸定量檢測結(jié)果時應(yīng)按照儀器讀數(shù)報告結(jié)果，注明使用的試驗方法、樣品種類和樣品量，當測定結(jié)果小于最低檢測限時，應(yīng)注明最低檢測限水平，低于最低檢測限的結(jié)果不能排除 HIV 感染。六、CD4T淋巴細胞計數(shù)CD4 T淋巴細胞計數(shù)是艾滋病診斷、疾病分期、制定抗病毒治療和預防機會性感染方案的實驗室標準指標，美國 CDC1993 年修訂的青年 / 成人艾滋病監(jiān)測病例分類及擴大的診斷標準是：無癥狀 HIV 感染期（ A 1 、 A 2 ）： CD4 絕對數(shù)≥ 500/mm 3 或 CD4 百分率≥ 29% ；有癥狀感染期（ B 1 、 B 2 ）： CD4 絕對數(shù) 200-499/mm 3 或 CD4 百分率 14-28% ； AIDS 期（ A 3 、 B 3 、 C 1-3 ）： CD4 絕對數(shù)＜ 200/mm 3 或＜ 14% 。 CD4 T 淋巴細胞計數(shù)也是與病毒載量相配合預測疾病進程的可靠指標，這兩個實驗可以相互獨立預測艾滋病臨床過程和生存期。檢測 CD4 細胞數(shù)的標準方法是流式細胞儀。影響 CD4 細胞數(shù)的因素有季節(jié)、晝夜差、某些并發(fā)癥和皮質(zhì)醇類藥物等，而性別、成人年齡、緊張、生理性應(yīng)激和妊娠對 CD4 的細胞數(shù)影響不大。由于 CD4 百分數(shù)受變異影響較絕對數(shù)小，故 CD4 細胞百分率有時比絕對數(shù)對臨床更有意義。七、病毒變異和耐藥性的測定隨著 HAART 治療的廣泛開展，病毒變異和耐藥株正在不斷出現(xiàn)，甚至對一個藥物的耐藥可引起多種藥物的交叉耐藥。因此近年來各國相繼建立起病毒變異和耐藥的測試方法，目前常用的方法包括基因型 HIV 耐藥測試和表型 HIV 耐藥測試。 表型 HIV 耐藥性測試方法能直接測出 HIV-1 對藥物的敏感度，并能揭示事先存在或交叉的耐藥情況，有利于指導 HIV-1 感染者有效地用藥。目前市面上供應(yīng)試劑盒已有 2 種，即 AV （ Vicro Antivirogram ）和 PS （ Virologic PhenoSense ），兩者方法均應(yīng)用從生長于載體中的 HIV-1 而獲得的重組病毒和病人標本中蛋白酶與逆轉(zhuǎn)錄酶序列，分析與野病毒之間 IC50 值相差倍數(shù)，一般達 5—10 倍以上為陽性。這種方法的最大優(yōu)點是可以獲得各種藥物耐藥量度數(shù)據(jù)，但不足的是試驗慢又昂貴，技術(shù)要求高。當病毒對某些藥物產(chǎn)生耐藥性時，病毒基因會發(fā)生一些明確的突變。病毒耐藥基因型的檢測有助于預測某些藥物的治療效果?；蛐?HIV 耐藥性測試方法是通過從病人血液標本中分離到的 HIV 基因物質(zhì)，應(yīng)用核酸酸序列分析或雜交技術(shù)以確定病毒變異的位點，并可參考已有數(shù)據(jù)庫按不同亞型進行比較。在確認變異后，與既往耐藥或交叉耐藥研究比較，間接地估計藥物耐藥情況，簡單快速，費用低。缺點是能確認所分離到的基因變異，但無法指出藥物耐藥的程度。應(yīng)當強調(diào)的是，我國自 1995 年進入艾滋病流行的快速增長期，感染者中約 70% 為經(jīng)靜脈吸毒等血液途徑感染，按艾滋病自然病程，近 1-2 年將會出現(xiàn)艾滋病的發(fā)病高潮，醫(yī)院系統(tǒng)所承擔的艾滋病檢測工作將愈來愈重，因此各醫(yī)院檢驗科應(yīng)嚴格按《規(guī)范》要求，通過 HIV 抗體篩查和確認試驗提供準確的 HIV 感染診斷，通過 CD4 T 淋巴細胞計數(shù)和 / 或 HIV 核酸定量檢測為艾滋病診斷、判斷疾病進展和抗艾滋病治療療效觀察提供可靠的實驗室數(shù)據(jù)。HIV體外存活期科學家和醫(yī)學權(quán)威一致認為HIV在外界環(huán)境中無法正常存活，這一觀念徹底否定了HIV在外界環(huán)境傳播的可能性。只有在血液，精液，陰道分泌物，乳液，唾液和淚液中才找得到HIV病毒，而且它的病毒載量在這些體液中差別很大。為了得到有關(guān)HIV存活率的資料，實驗室使用了人工培養(yǎng)單位數(shù)量多的HIV病毒的。盡管這些人工培養(yǎng)出來的病毒在精確的控制和實驗室有限條件下存活了十幾天甚至幾周，可是CDC研究顯示盡管是載量高，90%-99%的HIV病毒在幾個小時內(nèi)也會很快死亡。既然實驗室研究用的HIV病毒的載量比在血液或者其他體液中的載量高很多，隨著感染了HIV的人類血液或者其他體液自身死亡，這便降低了理論上在外界感染上HIV的機會。那些對實驗室結(jié)論的不準確的解釋更多的是引起了人們不必要的恐慌。愛滋病(AIDS)全稱獲得性免疫缺陷綜合癥，是由人類免疫缺陷病毒引起的一種免疫系統(tǒng)疾病。其病毒直接攻擊人體的T淋巴細胞，導致人體的免疫系統(tǒng)全面癱瘓，病人最后一般死于腫瘤。傳播途徑：血液、母嬰和性接觸。目前還無特效藥或疫苗可治療。（一般常以雞尾酒療法治療，但副作用較大）